高效液相色谱法研究二氢齐墩果酸的血浆稳定性与蛋白结合率

目的：高效液相色谱法测定二氢齐墩果酸在大鼠血浆中的稳定性以及血浆蛋白结合率，以期为二氢齐墩果酸的临床药物开发研究提供依据并建立出相应检测方法。方法：以高效液相为检测手段，采用超滤法考察二氢齐墩果酸与大鼠血浆蛋白的结合情况。结果：二氢齐墩果酸在大鼠血浆中质量浓度为1~20 μg/ml时，血浆稳定性好，大鼠血浆蛋白结合率较高且无浓度依赖性。结论：建立的超滤法能够满足血浆蛋白结合率测定的要求，建立的高效液相检测方法满足二氢齐墩果酸的体外试验检测。

齐墩果酸(Oleanolic acid, OA)是具有保肝护肾、抑制血小板凝集、降血脂、降糖、抗癌、抗应激、抗微生物等作用的一类五环三萜类化合物[1] [2]。

前期课题组抗糖尿病药物研究中发现将齐墩果酸双键还原的衍生物二氢齐墩果酸，具有较强的促葡萄糖消耗活性，是一个值得开展深入研究的化合物。在化合物开发的过程中，所测定的血浆稳定性以及血浆蛋白结合率是前期研究基础，药物吸收入血后只有游离型的药物能从血液进入作用部位发挥药理作用，而结合型的药物则无药理活性，游离型药物的浓度与药物的药效学、毒理学过程密切相关[3] [4] [5]。本实验采用超滤法测定二氢齐墩果酸与大鼠血浆中的蛋白结合率[6] [7] [8]，为二氢齐墩果酸的有效应用及测试方法的研究提供一定的理论依据。对于处于开发阶段的化合物二氢齐墩果酸，及早地预测和评估血浆稳定性以及血浆蛋白结合是有一定现实意义的[9] [10]。

2. 材料 2.1. 仪器 高效液相色谱仪(型号Waters e2695，美国沃特世公司)；漩涡混合器(型号XH-B，江苏康健医疗用品有限公司)；氮气吹扫仪(型号JN300-2， 苏州吉米诺仪器有限公司)高速离心机(GENESPEED 型号X1, Gene Company Limited)超声波清洗器(型号KH-600E，昆山禾创超声仪器有限公司)；十万分之一电子天平(型号FA805N，上海菁海仪器有限公司)超低温保存箱(型号：DW-86L486, Haier)。

2.2. 药品与试剂 二氢齐墩果酸(贵州医科大学药物化学重点实验室制备， 经高效液相色谱鉴定纯度大于98%)；乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)均购自德国Merck 公司；水为屈臣氏超纯水[11]。

2.3. 动物 清洁级SD 大鼠6 只，♂，体质量200~250 g，鼠龄：12~14 周，大鼠购自重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司，合格证号：SCXK(渝)2012-0011 [11]。